醫(yī)院藥學/藥品無菌檢查法

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醫(yī)院藥學

醫(yī)院藥品檢驗

醫(yī)院藥學目錄

（一）概念

無菌檢查法系指檢查藥品與微敷料是否無一種方法。

無菌檢查法的全部過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物的污染。

生物制品應按衛(wèi)生部《生物制品造及檢定規(guī)程》中有關(guān)無菌的檢查的規(guī)定辦理。

（二）培養(yǎng)及基及其制方法

1．需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基

酷凍（胰酶水解）	15g氯化鈉	2.5g
葡萄糖	5g新鮮配制的0.1％天青溶液	1.0ml
L胱氨酸	0.5g（或新鮮配制的0.2% 亞甲藍溶液0.5ml）
硫乙醇酸鈉	0.5g瓊脂	0.5-0.7g
（或硫乙醇酸0.3ml）	水	1000ml
酵母浸出粉	5g

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié) pH為北堿性，煮沸，濾清，按量加入葡萄糖和天刃溶液搖勻，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后為7.1±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

2．霉菌培養(yǎng)基

胨	5g硫酸鎂（MgSO₄.7H₂O	0.5g
葡萄糖	10g水	1000ml
磷酸二氫鉀（KH₂PO₄）	1g

除葡萄糖外，取上述成份加入水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH 約6.0，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)值使滅菌后為5.8±0.2，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

3．選擇性培養(yǎng)基（1）對氨基苯甲酸培養(yǎng)基（用于磺類藥物的無菌檢查）：照上述需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基及霉菌培養(yǎng)基的處方及制法，各加對氨基苯甲酸0.125g，溶解后搖勻，分裝，115⁰滅菌30分鐘。（2）吐溫培養(yǎng)基（用于油劑藥品的無菌檢查）；照上述需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基及霉菌培養(yǎng)基的處方及制法，各加10ml吐溫80，搖勻后，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

4．普能肉湯培養(yǎng)基

胨 10g 氯化鈉 5g 肉浸液 100ml

取胨與氯化加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

5．普能肉湯瓊脂培養(yǎng)基（供細菌用平及斜面），照上述普通肉湯培養(yǎng)基的處方及制法，加入15－20g瓊脂，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

6.0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

胨 10g 葡萄糖 5g

氯化鈉 5g 肉浸液 100ml

取胨與殷化鈉加入肉浸液溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，加葡萄糖溶解后搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

上述培養(yǎng)基分別加按15ml與40ml分裝與試管中，裝量約為試管高度的的2／5，在115⁰滅菌30分鐘。細菌培養(yǎng)基經(jīng)30－35℃培養(yǎng)48小時。霉菌培養(yǎng)基經(jīng)20－257.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

培養(yǎng)72小時后，應無菌生成。

培養(yǎng)基質(zhì)量應能通過以下檢查。

（1）需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基經(jīng)按種按每1ml含100個以下的藤黃八疊球菌［CMCC（B）28001］菌液1ml，置30－35℃培養(yǎng)24小時后應生長良好。

（2）需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基經(jīng)接種每1ml含50個以下的生孢梭［CMCC（B）64941］菌液1ml，置30－35℃培養(yǎng)24小時后應生長良好。

（3）霉菌培養(yǎng)基經(jīng)接種每1ml含50個以下的白色念珠菌菌液1m，置20－25℃培養(yǎng)24小時后應生長良好。

［附注］肉浸液制備法：取新鮮牛肉，除去肌腱及脂肪，切細，絞碎后，每1000g加水3000ml，充分拌勻在2-10℃浸泡20－24小時，煮沸1小時，濾過，壓肉渣，補足液量分裝，121℃滅菌30分鐘，置冷暗處備用。也可用牛肉浸膏3g，加水1000ml，配成溶液代替。

（三）對照用菌液

金黃色葡萄糖菌菌液：取金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳。接種至需氣菌培養(yǎng)基內(nèi)，在30－35℃培養(yǎng)16－18小時后，用滅菌的生水稀釋成1：10⁶。

（四）檢查法

1．供試品如為注射液，供角膜創(chuàng)傷物術(shù)用的滴眼劑或滅菌溶液，任取供試品2支（瓶）以上，用適當消毒液清潔供試品容器的外表面后，以無菌操作吸取接種量的供試品溶液，分別接種于需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基5管，其中1管接種對照用菌液1ml，供作陽性對照；另接種于霉菌培養(yǎng)基2管，供試品溶液的每管接種量與培養(yǎng)基的分裝量，應根據(jù)供試品的裝量，按下列規(guī)定取用：

供試品裝量	每管接種量	培養(yǎng)基分裝量
2ml或2ml以下	0.5ml	15ml
2ml以上至2ml	1.0ml	15ml
20ml以上	5.0ml	40ml

接種后輕輕搖動，使勻。需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基在30－35℃培養(yǎng)5日，霉菌培養(yǎng)基在20－25℃培養(yǎng)7日，抗生素類藥品均培養(yǎng)7日，放射性藥品培養(yǎng)5-7日。培養(yǎng)期間應逐日檢查是否有菌生長（陽性對照在24小時內(nèi)應有細菌生長）；如在加入供試品溶液后，增培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時，可取該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另1支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48－72小時后，觀察是否現(xiàn)渾濁或在斜面上有無菌落生長。并在轉(zhuǎn)種的同時，取培養(yǎng)液少量，涂片制成染色標本，用顯微鏡觀察是否有菌生長。

2．供試品如為注射用滅菌粉末或無凍干品，照該藥品項下的規(guī)定或按該藥品劑量項下的溶劑用量加入滅菌用水或滅菌生理鹽水，使內(nèi)容物解成均勻的供試品溶液，取接種量的供試品溶液，接種于上述培養(yǎng)基中。

3．供試品如為供直接分裝成注射用無菌粉末的原料藥，按各藥品項下的規(guī)定制成溶液,依法接種于培養(yǎng)基中。

4．供試品如外科敷料，取供試品2個包裝，以無菌操作拆開包裝，于不同部位前取約1cm×3cm的樣品，分別接種于40ml培養(yǎng)基中。

5．供試品如有抑菌作用或含有抑菌物質(zhì)時，可選用適宜的培養(yǎng)基，或種入較大量的培養(yǎng)基中，使該供試品稀釋至不具有抑菌作用的濃度；或照下述“薄膜過濾法”處理并接種于培養(yǎng)基中。

6．供試品如為抗生素藥品，取供試品不少于2瓶（支）或2份（原料經(jīng)）分別按該藥品項下規(guī)定的方處理后，種入每管裝量為40ml的培養(yǎng)基中，分別依法檢查。

（1）青霉素酶法。取規(guī)定量的供試品，加入足夠使青霉素滅活的無菌青霉酶溶液，使成約10ml，分別等量接種于培養(yǎng)基中。

（2）薄膜過濾法。取規(guī)定量的供試品，加入來菌生理鹽水100ml或其他適宜的溶劑中，搖勻，以無菌加入裝有直徑約50mm、孔徑不大于0.45±0.2μm微孔濾膜的薄膜過濾器內(nèi)，減抽干后，用滅菌生理鹽水或其他適宜的溶劑沖洗濾膜3次，每次ml；取出濾膜，分成4片，取3片分別放在3管需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基中，其中1管接種對照用液1ml，供作陽性對照，另取1片放在霉菌培養(yǎng)基管中。

7．供試品如為放射性藥品，取供試1瓶（支）以每管接種量為0.2ml,接種于每管裝量為7,5ml的培養(yǎng)基中。

（五）結(jié)果判斷

當陽性對照和顯渾濁確有細菌生長時可根據(jù)觀察所得的結(jié)果判定：如需氣菌、厭氣菌及霉菌培養(yǎng)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長，均應判為供試品合格；如需氣菌、厭氣及霉菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并確證為有菌生長，應重新取樣，分別依法復試2次，除陽性對照管外，其他各管均不得有菌生長，否則應判為供試品不合格。