醫(yī)院藥學(xué)/細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法

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醫(yī)院藥學(xué)

醫(yī)院藥品檢驗(yàn)

（一）概述本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集的反應(yīng)機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。

細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸桿菌提取精制得到內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物，以過協(xié)作標(biāo)定，使標(biāo)準(zhǔn)品單位與國際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致。用于標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品和促裁鱟試劑靈敏度。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物進(jìn)行標(biāo)定，確定基重量的相當(dāng)效價(jià)。每1mg工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。效價(jià)測定方法如下：每批工作標(biāo)準(zhǔn)品至少取4支樣品，使用同一批號鱟試劑、同1支標(biāo)準(zhǔn)品。每支工作標(biāo)準(zhǔn)品按重量、標(biāo)準(zhǔn)品按單位，分別用內(nèi)毒素檢查用水^＊稀釋制備一系列2倍稀釋度的內(nèi)毒素溶液，與鱟試劑反應(yīng)，當(dāng)4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的對數(shù)均值的標(biāo)準(zhǔn)差（S）小于0.365時，計(jì)算4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的幾何平均值（以ng/mg表示）及標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)值以（以EU／mg表示），按下式計(jì)算。

（二）試驗(yàn)準(zhǔn)備本法所用的器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素常用250℃干烤30分鐘或180℃干烤2小時，也可用其他適宜方法。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。

試驗(yàn)前需核對使用批號鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值，應(yīng)符合規(guī)定。裝量加入配帶的鱟試劑溶劑。溶解后，為鱟試劑溶液，備用。

供試品的稀釋：使用批號鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值小于供試品的內(nèi)毒限量時，按下式計(jì)算，用內(nèi)毒素檢查用水^＊將供試劑品稀釋后進(jìn)行檢查。

供試品的稀釋倍數(shù)＝X／λ

X：供試品的內(nèi)毒素限量內(nèi)毒素限量（EU／ml）

λ：供試品鱟度劑靈敏度標(biāo)示值（EU／ml）

(三)檢查裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管（或0.1ml／支規(guī)格的鱟試劑原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供試品作為試品管，1支加入2λ內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品0.1ml作為陽性對照管，1支加入配帶的鱟試劑溶液0.1ml作為陰性對照管。將試管輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中，保溫60±2分鐘。保溫過程和拿取試管要小心，避免因受到振動造成陰性結(jié)果。

（四）結(jié)果判斷將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180⁰時，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性記錄為（＋）凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（一）。供試品2管如為（一），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定，不再進(jìn)行熱原檢查法（家兔法）試驗(yàn)。如2管均為（＋），應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定。如2管中1管為（＋），1管為（一），按述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中有1管為（＋）即認(rèn)為不符合規(guī)定。除正文另有規(guī)定外，有符合規(guī)定的供試品應(yīng)再以熱原檢查法（家兔法）試驗(yàn)，并根據(jù)的結(jié)果判定。

供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限量應(yīng)符合各品種正文下的規(guī)定。

陽性對照為（一）或陰性對照為（＋），試驗(yàn)無效。

附滅菌注射用水、注射用水、氯化鈉注射液、5％和10％葡萄糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

【細(xì)菌內(nèi)毒素】取本品，依法檢查，供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限量不應(yīng)超過1EU／ml。如超過1EU／ml，需經(jīng)熱原檢查法（家兔法）判定。