臨床生物化學(xué)/其它影響酶活性因素

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臨床生物化學(xué)

血清酶定量的檢測(cè)技術(shù)
- 酶活性測(cè)定條件的選擇和限定
  - 底物、輔因子、活化劑、變構(gòu)劑的種類和濃度
  - 指示酶與輔助酶的種類和濃度
  - 反應(yīng)體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度
  - 其它影響酶活性因素
  - 溫度的控制

除了上述主要因素外，一些其它因素也會(huì)影響酶活性，如反應(yīng)體系中含有氧化劑，可氧化酶蛋白中甲硫氨酸、色氨酸和酪氨酸殘基，使酶失活，試劑盒中常用的一些表面活性劑如Tween-80、Brig-35等會(huì)抑制一些酶的活性。

其它因素中，對(duì)酶測(cè)定而言，最重要的是抑制劑的作用，抑制作用是酶學(xué)中的一個(gè)重要研究?jī)?nèi)容。但如只涉及到設(shè)計(jì)和選擇測(cè)定酶的方法，則比較簡(jiǎn)單，既然要測(cè)定的是“最適條件”下的最大反應(yīng)速度，那么不論是可逆或不可逆抑制劑，也不論是競(jìng)爭(zhēng)性、非競(jìng)爭(zhēng)性、反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑都應(yīng)在反應(yīng)體系中設(shè)法除去。此問(wèn)題在測(cè)定尿液中尤為突出。尿中排出大量代謝產(chǎn)物，不少物質(zhì)會(huì)影響酶，如脲可使酶解聚、磷酸鹽抑制磷酸酶活性。在病理情況下尤其使用各種藥物后，使情況更為復(fù)雜，此時(shí)尿中可出現(xiàn)不少正常情況下不出現(xiàn)物質(zhì)，即可能抑制酶活性，也可能激活酶活性。為使脲酶測(cè)定結(jié)果有一定可比性，最好在測(cè)定脲酶前，通過(guò)透析、凝膠層析或超濾將小分子化合物與酶分開(kāi)，這樣較為可靠。